Mycobacturium tuberculosis

Mycobacterium tuberculosis

 

JUSTIFICACIÓN

La tuberculosis es una enfermedad de distribución mundial causada por el Mycobacterium tuberculosis que constituye un importante problema de salud pública. El rol del laboratorio es esencial en la detección de los casos, la confirmación

del diagnóstico de tuberculosis, en la evaluación de la eficacia del tratamiento, en la orientación de la elección de esquemas terapéuticos cuando se presenta resistencia a los medicamentos y en la vigilancia de la resistencia a drogas antituberculosas utilizadas por el Programa de Control.

AGENTE ETIOLÓGICO

Mycobacterium tuberculosis: Es una bacteria ácido-alcohol resistente, frecuentemente incolora, aeróbica estricta. Su crecimiento está subordinado a presencia de oxígeno y al valor del pH circundante. Es muy resistente a las condiciones de frío, congelación y desecación. Por el contrario, es muy sensible a las de calor, luz solar y luz ultravioleta.

 Familia:        Mycobacteriaceae

Género:       Mycobacterium

Complejo:   M. tuberculosis

Especie:     M. tuberculosis

ENFERMEDAD QUE  PRODUCE

La tuberculosis es una infección bacteriana contagiosa que compromete principalmente a los pulmones, pero puede propagarse a otros órganos. La tuberculosis es posiblemente la enfermedad infecciosa más prevalente en el mundo.

El modo más común de diseminación de la enfermedad es por la inhalación de partículas infecciosas expulsadas con la expectoración de las personas afectadas

por tuberculosis pulmonar (vía aérea). La infección de los contactos es más probable si conviven o permanecen durante un tiempo prolongado cerca del enfermo que está expectorando bacilos y en un ambiente poco ventilado.

No todas las personas infectadas enferman, sólo una de cada diez aproximadamente, que son las más susceptibles.

Los síntomas más característicos de la tuberculosis pulmonar son la tos y la expectoración que persisten por 2 semanas o más. . A las personas con estos síntomas se los llama Sintomáticos Respiratorios (SR).

TIPOS DE MUESTRAS

Origen pulmonar: Esputo, Lavado broncoalveolar, secreción traqueal

Origen extrapulmonar: Liquido cefaloraquideo, ganglio, biopsia, secreción purulenta, Liquido pleural, liquido gástrico, orina

TOMA DE MUESTRA DE ESPUTO

 Enjuagarse la boca y recoger la secreción después de hacer aproximadamente 3 esfuerzos de tos para que salgan secreciones de los bronquios. Una buena muestra de esputo es aquella que proviene del árbol bronquial, es generalmente espesa y mucoide.

Para el Diagnóstico se necesitan 3 (tres) muestras.

Para Control de tratamiento una sola muestra.

Otras muestras: La toma de muestra la realiza el paciente cuando se trata de esputo u orina, en frascos limpios de tapa a rosca (primera muestra de la mañana). Las demás muestras son tomadas por personal médico.

 

CONSERVACION Y TRANSPORTE DE MUESTRAS Y CEPAS

Muestras: Cuanto antes se procesa la muestra de esputo después de la recolección, mayor será la probabilidad de aislar los bacilos que puedan existir en ella. Las muestras deben ser remitidas al laboratorio el mismo día de su obtención, si esto no fuera posible envolver los envases con una bolsa de plástico anudada individualmente y mantenerlos en el refrigerador, o de lo contrario mantenerlas en un lugar fresco y alejadas de los rayos solares.

El tiempo que transcurre entre la recolección del esputo y el procesamiento de la muestra  no debe ser mayor de una semana. La muestra debe enviarse con la ficha de solicitud de análisis completo (formulario No 2).

Cepas: Los requisitos mínimos para el transporte seguro de cultivos son: acondicionar los tubos a enviar con triple envase (Cajas SISTEG), con la ficha de remisión de cepas correctamente llenada.

 

TÉCNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS

BACILOSCOPIA: MÉTODO DE ZIEHL-NIELSEN: Observación microscópica de la muestra teñida con colorantes específicos, tinción basada en la alcohol-ácido-resistencia que presentan las Micobacterias.

CULTIVO: 1. Siembra de las muestras que no son esputos en el medio de cultivo Lowenstein-Jensen, previo tratamiento con el método de Petroff. La lectura debe efectuarse a los 30 y 60 días.

  1. Siembra de los esputos en el medio de Ogawa – Kudoh, previo tratamiento con el método de Ogawa – Kudoh modificado.

La lectura debe efectuarse a los 30 y 60 días.

ESTUDIO DE SENSIBILIDAD: método de las proporciones de Canetti, Rist y Grosset. Esta técnica se basa en la comparación porcentual del desarrollo bacteriano entre el medio de cultivo con antibiótico para cada y un medio de control. La lectura se efectúa a los 28 días.

METODO DE LA NITRATO REDUCTASA: Este método utiliza la determinación de la actividad de la nitrato reductasa que en cultivos de crecimiento activo de M. tuberculosis da como resultado una reacción colorimétrica. Este cambio de color permite la detección temprana del crecimiento en tubos controles (sin fármacos) con los tubos que contienen fármacos anti-tuberculosos.

TÉCNICA DE WAYNE: Se utiliza para el estudio de sensibilidad a Pirazinamida, método químico enzimático indirecto de reacción colorimétrica.  La lectura se efectúa a los 7 días.

ESTUDIO DE IDENTIFICACIÓN:

  • Caracteristicas de las colonias: morfología: forma, consistencia, superficie, pigmentción.
  • Prueba inmunocromatográfica: para diferenciar entre Complejo M. tuberculosis y Micobacterias no tuberculosas.
  • Prueba de la Niacina.

GENE-XPERT: Identificación de Mycobacterium tuberculosis (complejo) y detección de resistencia a la Rifampicina. (Anexo 4)

  • Método: PCR en Tiempo Real
  • Muestras analizadas por el equipo: a) Pulmonar: Esputo, secreción traqueal, BAL (lavado broncoalveolar) b) Extrapulmonar: Ganglio, biopsias, LCR, líquido gástrico.

Obs: Se necesita UNA SOLA MUESTRA por paciente para su análisis

  • Conservación y transporte de las muestras: Pueden analizarse hasta 10 días después de la fecha de toma de muestra, siempre que se mantenga refrigerada.
  • Para envíos desde el interior, deben enviarse en triple contenedor con hielo (seco si es posible), según normas establecidas para el envío.
  • Todas las muestras deben enviarse con la ficha de solicitud de análisis completo (formulario No 2).
  • El cultivo presenta mayor sensibilidad que el Gene-Xpert.
  • El test detecta ADN y no discrimina la viabilidad de la bacteria.
  • Todas las muestras diferentes de esputo presentan menor sensibilidad.

 

CONTROL DE CALIDAD

Control Interno:

  • Control de calidad de lotes de colorantes
  • Control de sensibilidad del medio de cultivo Ogawa Kudoh
  • Control de sensibilidad y resistencia al medio de cultivo Lowenstein Jensen con drogas antibacilares utilizando la cepa H37rv y una cepa

 

Control Externo:

Evaluado por el Laboratorio Supranacional, INSTITUTO MALBRAN de Buenos Aires, Argentina y el Instituto Cohni de Santa Fe, Argentina.

 

ENVÍO DE CEPAS AL LABORATORIO

Envío: La derivación de las cepas al Laboratorio de Referencia debe hacerse lo más próximo al momento del hallazgo de positividad de los cultivos (máximo 10 días), durante este tiempo deben conservarse las cepas a 4ºC.

Las cepas deben enviarse con identificación clara y en el formulario diseñado para tal efecto.

Transporte: El transporte de las cepas debe hacerse protegiendo cada tubo (papel, plástico, plumavit, etc.), en una caja resistente. Al exterior de la caja debe adherirse un sobre que contenga los formularios de las cepas con los respectivos antecedentes del paciente.

Los requisitos mínimos para el transporte seguro de cultivos positivos de M. tuberculosis: Acondicionar los tubos a enviar con triple envase (Cajas SISTEG).

El embalaje debe indicar destino y remitente en forma clara y señalar que contiene material frágil.

 

ENTREGA DE RESULTADOS:

  • Baciloscopia: en 72 hs
  • Cultivo: resultado final a los 60 dias.
  • Gene-Xpert: 3 días hábiles

NIVEL DE BIOSEGURIDAD:

Todas las actividades laboratoriales se realizan con nivel de Bioseguridad 2+.

 

ANEXO 1

FLUJOGRAMA DE CULTIVO DE Mycobacterium tuberculosis

 anexo1

 ANEXO 2 

 FLUJOGRAMA DE DECONTAMINACIÓN POR EL MÉTODO DE PETROFF  MODIFICADO

anexo2

 

ANEXO 3

FLUJOGRAMA DE LA INTERPRETACIÓN E INFORME DE LOS CULTIVOS  DE Mycobacterium tuberculosis

anexo3

anexo12

 

ANEXO 4

 ALGORITMO DE MUESTRAS DE PACIENTES SELECCIONABLES PARA EL DIAGNOSTICO POR GENE-XPERT MTB/RIF

 

anexo4